FRET 펩타이드 기술

형광 공명 에너지 전달(FRET)

형광 공명 에너지 전달(FRET)은 분자간 전기쌍의 상호작용을 통해 공여체 여기 상태 에너지가 수용체 여기 상태로 전달되는 비방사 에너지 전달 과정입니다.이 과정에는 광자가 포함되지 않으므로 비방사성입니다.이 분석은 빠르고 민감하며 간단하다는 장점이 있습니다.

FRET 분석에 사용되는 염료는 동일할 수 있습니다.그러나 대부분의 응용 분야에서는 실제로 다른 염료가 사용됩니다.간단히 말하면, 발광 공명 에너지의 전달은 기증자 그룹이 여기될 때 기증자(염료 1)에서 수용체(염료 2)로 한 쌍의 쌍극자가 전달되는 것입니다.일반적으로 Donor 형광단 그룹의 방출 스펙트럼은 Acceptor 그룹의 흡수 스펙트럼과 겹칩니다."두 개의 형광단 사이의 거리가 적절한 경우(10 - 100A) 공여체에서 수용체로 형광단 에너지가 전달되는 것을 관찰할 수 있습니다."에너지 전달 방법은 수용체의 화학 구조에 따라 다릅니다.

1. 분자진동으로 변환되어 에너지 전달의 발광광이 사라진다.(수용체는 빛 소광제입니다)

2. 방출은 수용체 자체보다 더 강렬하여 2차 형광 스펙트럼에 적색편이가 발생합니다.”(수용체는 발광체입니다).

기증자 그룹(EDANS)과 수용자 유전자(DABCYL)는 HIV 프로테아제의 천연 기질에 균일하게 연결되어 있으며, 기질이 분리되지 않은 경우 DABCYL은 EDANS를 억제한 다음 불소를 검출할 수 없게 됩니다.HIV-1 프로테아제 연결이 끊어지면 EDANS는 더 이상 DABCYL에 의해 소멸되지 않으며 이후에 EDANS 루시퍼라제가 검출될 수 있습니다.프로테아제 억제제의 가용성은 EDANS의 형광 강도 변화를 통해 모니터링할 수 있습니다.

FRET 펩타이드는 펩티다제 비특이적을 연구하는 편리한 도구입니다.반응 과정을 지속적으로 모니터링할 수 있어 효소 활성을 검출하는 편리한 방법을 제공합니다.기증자/수용자에 의한 펩티드 결합의 가수분해 후에 생성된 광택은 나노몰 농도에서 효소 활성의 척도를 제공합니다.FRET 펩타이드가 손상되지 않으면 내부 플래시가 갑자기 사라지지만 공여체/수용체 반대편의 펩타이드 결합이 끊어지면 플래시를 방출하며 이를 지속적으로 감지할 수 있으며 효소 활성을 정량화할 수 있습니다.