배경
Afamelanotide로도 알려진 Melanotan I은 13개의 아미노산으로 구성된 선형 폴리펩티드로 제약 연구에서 점점 더 중요한 역할을 담당할 예정입니다. Melanotan I의 주요 영어 이름은 Melanotan-1과 Afamelanotide입니다. α-멜라닌 세포 자극 호르몬 α-MSH)의 합성 유사체로서 Melanotan I은 적혈구 생성 프로토포르피린증으로 인한 광과민성 장애를 치료하는 데 사용할 수 있습니다. 현재 대부분의 Melanotan I 제품은 연구용으로만 라벨이 지정되어 있으며 아직 인간에게 적용할 수는 없습니다. 전통적인 고체상 합성에서는 수지의 선택이 결합 효율성과 제품의 최종 순도에 큰 영향을 미칩니다.
기본 정보
중국 이름: Melanotan 1
영어 이름: Melanotan-1
회사 번호 : GT-A006
CAS 번호: 75921-69-6
순서: SYS{Ne}EH{D-Phe}RWGKPV-NH2
분자식: C78H111N21O19
분자량: 1646.88
준비 방법
나. Fmoc-Val-Amino 수지의 제조
1단계:치환도가 0.45mmol/g인 Ramage Amide AM 수지 11.11g(5mmol)을 달아 고상반응기에 첨가한다. DCM을 첨가하여 수지를 30분 동안 팽윤시킨 후 배수합니다. DMF로 3회 세탁하세요. 20% 피페리딘(v/v)이 포함된 DMF 용액을 추가하고 5분간 반응합니다. 또 다른 20% 피페리딘 DMF 용액을 추가하고 그 사이에 1회 DMF 세척을 하면서 10분간 반응합니다. 반응이 완료된 후 물기를 빼고 DMF로 3회 세척합니다.
2단계:Fmoc-Val-OH 5.09g, HOBT(1-하이드록시벤조트리아졸) 2.02g, DIC(N,N'-디이소프로필카보디이미드) 2.32ml를 0°C의 DMF에 녹입니다. 완전히 용해된 후 혼합물을 반응 컬럼에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 반응시킨다. 닌히드린 테스트를 사용하여 반응 진행 상황을 모니터링하여 부정적인 결과를 확인합니다. 반응이 완료된 후 DMF로 3회 세척하여 Fmoc-Val-아미노 수지를 얻습니다.
II. 멜라노탄의 완전히 보호된 수지 펩티드의 제조 I.
1단계:위의 Fmoc-Val-aminoresin에 DMF 용액(부피비)에 20% 피페리딘을 첨가합니다. 5분간 반응한 후 DMF 용액에 20% 피페리딘을 추가하고 10분간 반응합니다. 그 사이에 DMF로 1회 세탁하세요. 반응이 완료된 후 진공 건조하고 DMF로 3회 세척합니다.
2단계:5.06g Fmoc-Pro-OH, 2.02g HOBT(1-하이드록시벤조트리아졸) 및 2.32ml DIC(N,N'-디이소프로필카르보디이미드)를 0°C의 DMF에 용해시킵니다. 완전히 용해된 후 혼합물을 반응 컬럼에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 반응시킨다. 음성 결과가 나올 때까지 닌히드린 테스트(Kaiser 테스트)를 사용하여 반응 진행 상황을 모니터링합니다. 완료되면 DMF로 3회 세척하여 Fmoc-Pro-Val-aminoresin을 얻습니다.
3단계:2단계에 설명된 방법에 따라 Melanotan I의 순서에 따라 각 아미노산을 순차적으로 커플링합니다. Ac-Ser(tBu)-OH 커플링 반응이 완료된 후 DMF로 3회, DCM(디클로로메탄)으로 3회, 메탄올로 3회 세척합니다. 진공 하에서 건조하여 완전히 보호된 멜라노탄 I 수지 결합 펩타이드 23.89g을 얻습니다.
III. 멜라노탄 I 조펩타이드의 제조
완전히 보호된 멜라노탄 I 수지 결합 펩티드 23.89g을 둥근 바닥 플라스크에 넣었습니다. 0℃에서, 미리 준비된 절단 칵테일(TFA:티오아니솔:페놀:트리이소프로필실란:물 = 82.5:7.5:5:3:2 부피 기준으로 구성됨) 250ml를 교반하면서 천천히 첨가했습니다. 혼합물을 저온에서 0.5시간 동안 반응시킨 후, 상온에서 2시간 동안 반응시켰다. 이어서 절단 용액을 진공 하에 여과하였다. 이 용액을 교반하면서 얼음처럼 차가운 무수 디에틸 에테르 2L에 천천히 첨가하였다. 조 펩타이드를 여과하여 분리하고, 얼음처럼 차가운 디에틸 에테르로 3회 세척하여 멜라노탄 I 조 펩타이드 8.55g을 얻었다.
IV. 멜라노탄 I 정제된 펩타이드의 제조
1단계:조악한 멜라노탄 I 펩티드를 정제수 100ml에 녹이고 0.45μm 막을 통해 여과하여 조악한 펩티드 용액을 얻습니다.
2단계:고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 사용하여 원유 멜라노탄 I 펩티드를 정제합니다. 이동상 A(0.05% 트리플루오로아세트산 수용액) 및 이동상 B(아세토니트릴 내 0.05% 트리플루오로아세트산)가 포함된 DAC-HB50 동적 축 압축 컬럼을 활용합니다. 분리 및 정제를 위해 Gradient Elution을 수행합니다. UV 검출기를 사용하여 샘플을 검출하고 표적 피크에 해당하는 펩타이드 용액을 분수로 수집합니다.
3단계:HPLC 정제 후 순도 99%를 초과하는 멜라노탄 I 트리플루오로아세테이트 용액 180ml를 얻습니다. 회전 증발을 통해 용액을 50ml로 농축합니다.
4단계:크로마토그래피 컬럼을 탈이온수로 평형화하고 정제된 멜라노탄 I 트리플루오로아세테이트 용액(순도 >99%) 50ml를 로드합니다. 2% 아세트산 수용액 시스템에서 50분간 용출합니다. 회전 증발을 통해 수집된 목적 생성물을 80 ml로 농축합니다. 사전 동결 건조 및 동결 건조를 수행하여 궁극적으로 5.33g의 멜라노탄 I 정제 펩티드를 32.33%의 수율로 얻습니다.
게시 시간: 2026-01-05